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求助 qRT-PCR 与WB是可以互换的实验吗?

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878564 楼主
发布于 2021-11-13 14:36:10
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  • 1楼用户回贴

    这两个实验当然不可以互换。而且最好都要做。为什么?

    qRT-PCR检测得是mRNA水平表达,而western检测得是蛋白水平表达。可是蛋白不就是由mRNA翻译出来的么?表达水平应该与mRNA接近甚至相同啊!还真的不是!因为mRNA到蛋白过程还有多种影响因素,例如在哺乳动物体内,miRNA会结合在mRNA的3'UTR区,在不影响mRNA水平下,抑制蛋白质表达水平;即使mRNA在没有miRNA等因素的影响下翻译出来蛋白质,其他因素也会影响蛋白质的含量,例如,如果蛋白质的糖基化修饰发生错误或者异常,可能会导致蛋白质异常折叠,发生降解,使蛋白含量降低;再例如,目的蛋白虽然是胞浆蛋白,但是可以通过胞外囊泡分泌出去,从而降低胞内该蛋白的含量!

    综上,细胞内多种因素都可能导致mRNA与蛋白水平表达不一致,而探究mRNA或蛋白被何种机制调控也是很有意思的一件事。



    发布于 2021-11-13 15:40:37
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  • 2楼用户回贴

    不能互换,不过很多情况下如果wb结果不错可以跳过RT-PCR。有mRNA转录不代表就会被表达成蛋白,更无法保证蛋白表达量。而RT-PCR相比WB灵敏性和特异性都更高。如果RT-PCR都没检测出来,WB基本上不可能有条带,检测出来了才可以考虑WB没条带是实验材料步骤出了问题还是没有翻译表达。另外qPCR在定量方面一般比WB更精确,所以如果没有翻译或翻译后的特殊情况,qRT-PCR的结果也可以很好的反映基因表达量变化,在这种情况下结果是相似的。

    发布于 2021-11-13 15:59:18
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