识破各种污染，拯救您的细胞_实验干货_实用技巧

我们先来看看污染的真面目，总结下来无非以下几种类型：

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我们一起来分析它们的特征：

真菌-深藏不露

真菌之所以深藏不露，是因为它们一般不会导致培养基变浑浊，所以在污染早期，很难发现它们的踪迹。直到长到一定规模后在镜下可观察到分叉细丝状的菌丝（有些呈管状，树枝状，串珠状的菌丝）（如图1，图2）。这类污染中，为首的污染代表是酵母菌：显微镜下常见成串的珠状物，形态呈卵形，大约比细胞小5~10倍，当其进行出芽生殖时，会聚集成连体结构；爆发污染严重时，会造成培养基pH值改变，不易除去。

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解决方案：

表1.产品列表

产品名称-中文名称		作用种类
两性霉素B，250mg/ml		真菌，酵母菌和霉菌
两性霉素B，2500mg/ml		真菌，酵母菌和霉菌
制真霉素，10000units/ml		真菌，酵母菌和霉菌
青链双抗（青霉素-链霉素）		对革兰氏阳性菌G+，革兰氏阴毒性G-
青链双抗（青霉素-链霉素）10X浓缩		对革兰氏阳性菌G+，革兰氏阴毒性G-
青链霉素，制真菌素三抗		真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
青链霉素，两性霉素B三抗		真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
青链霉素，新霉素三抗		真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
硫酸庆大霉素溶液，50mg/ml		对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌，支原体
卡那霉素溶液，10mg/ml		对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌，支原体

细菌-屡见不鲜

细菌种类繁多，分布广泛，是最容易污染细胞的微生物。

细菌在显微镜下呈黑色细沙状（如图3），典型特征是，可以使培养基在短时间内变成黄色或白色浑浊。细胞形态会出现多角，多核状况；贴壁细胞不附着，停止生长甚至死亡。

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图3. 细菌污染

解决方案如上表1：

支原体-无孔不入

支原体之所以无孔不入是因为它们种类繁多，常以寄生或腐生营养方式生长，广泛存在于环境之中。

支原体是细胞培养过程中的常见污染，经常来源于实验人员（支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道）、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具。其大小只有0.15~0.3μm，所以能通过一般标准的细胞培养过滤方法，0.22μm过滤膜。其污染特征不是很明显，增长速度相较于细菌比较缓慢，污染初期（轻微）培养基可能依然清澈不会变黄，所以轻微污染时不容易用常规方法（细胞外观观察或是DNA染色法）确认。

支原体会缓慢改变细胞形态、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应，它携带的DNA/RNA与蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌体实验结果偏差。

如下图所示：

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支原体检测/处理/预防全套解决方案。

即用型细胞培养中支原体检测PCR试剂盒

检测结果如图：

大家可自行根据检测结果进行对比。

支原体处理试剂

支原体预防喷雾

支原体检测/处理/预防全套解决方案

表3. 产品列表

中文名称		备注
支原体污染检测试剂盒
支原体污染处理试剂


支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂
支原体预防试剂		100ml，有效消毒二氧化碳培养箱中的水盘
支原体预防试剂		50ml，有效消毒任何形式的水浴环境

黑胶虫-神秘莫测

黑胶虫污染后，在镜下可看到密密麻麻的小黑点在培养基中自主游动。目前科学界对黑胶虫的身份并无定论。Dr.Cell 目前检测的黑胶虫样本，62%为细菌，38%为支原体。黑胶虫在镜下的典型特征呈卵圆状、球状、杆状等，具有细胞毒性，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。

，时长00:32

黑胶虫游动视频

以下解决方案：

使用三抗结合支原体处理试剂有效清除实验室黑胶虫污染。

病毒-专一任性

病毒之所以“专一任性”是因为其污染和传播具有细胞专一性，“钟情”到一辈子吊死在一颗“树”上。病毒污染可能来自宿主动物细胞或病人，在细胞培养污染物中是相对最难检测的。被病毒污染的细胞在显微镜下能明显观察到细胞碎片增多、肿大、圆缩、脱落等病态变形，严重时会在单层细胞上观察到局部破损空斑（如图5，图6）。

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