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动物实验中,无菌操作这些要点需注意...

在动物实验的时候需不需要注意无菌操作呢?答案是肯定的,大多数实验在手术后还需要饲养相当长的一段时间,所以对于术后还要成活的这些动物实验还是需要注意无菌。


实验动物与细菌共处于一个庞大而复杂的生态平衡之中,进行手术、穿刺、注射、换药、插导管等各项操作时,必须提前做好对应的准备,确保各个流程都能够达到无菌化操作要求,防止细菌进入机体,预防细菌感染。


在介绍动物实验无菌操作之前,我们先来了解下灭菌、消毒以及抗菌的概念

灭菌是用物理或化学方法杀灭一切活的微生物(包括细菌芽胞),包括致病及非致病性微生物,灭菌是绝对的。

消毒是指直接杀灭病原微生物,使之达到无害的程度。消毒的效果因所用消毒剂的杀菌效力、使用浓度和方法以及微生物的类型、数量等而异。高效消毒剂可达到灭菌要求,但对机体的刺激性和毒性多较大,对器械有不同程度的腐蚀性;低、中效消毒剂可全部或几乎全部杀死细菌繁殖体,一般不能杀死芽胞和亲水病毒,刺激性和毒性较小。

抗菌是杀灭或抑制活组织中微生物的生长繁殖,以防止感染,很多中、低效消毒剂在一定浓度时起抗菌作用。由于不同抗菌剂所能够起到的抗菌作用存在差异,对具体用量要求也有所不同,必须根据规范要求,合理、正确使用抗菌剂。

下面我们从动物实验方面简单介绍下无菌操作。


无菌操作,是指在无菌室或超净台中进行以防止微生物进入实验体或污染供试菌的操作技术。无菌操作是控制感染的基本途径,做好无菌化控制,能够尽量将创口污染和术后感染发生的概率降到最低。


在目前大多数动物实验手术操作过程中,污染来源主要包括两个基本方面:


一是手术室中的人员、手术器械、相关设备和患病动物本身,在消毒处理不彻底的情形下,这些环节都有可能出现感染现象。

二是手术过程中创伤感染所产生的细菌。虽然手术室内的细菌来源较为简单,但是由于空气流动的存在,使其成为细菌传播的重要媒介。因此要求①操作前将操作空间中的细菌和病毒等微生物杀灭;②操作过程中保证操作空间与外界隔离,避免微生物的侵入;③在手术室内限制非必需人员的数量、减少不必要的走动和交谈可以最大限度地减少空气湍流的形成。

动物实验中的无菌操作


动物实验无菌操作不仅局限于手术过程,还是贯穿在整个实验工作中。实验前期的准备、实验中的操作、还有实验后动物的观察及护理。


01 术前准备




(1)实验室内空气污染是动物外科手术感染的主要原因,可采用紫外线照射法和甲醛熏蒸法对实验室进行消毒。

(2)实验所用器皿、手术器材等进行消毒灭菌(需有外包装),必要时使用一次性无菌用品。在手术前将手术所需一切材料(包括手术中用到的仪器、器械、敷料等)准备好并带入手术实验室(在术中再进出手术实验室将增加动物感染风险)。

(3)准备好个人防护设备(乳胶手套、口罩、抓捕手套、隔离衣等)。必要时(如手术后动物需存活,且要碰触动物内脏的手术)须戴无菌手套进行动物手术。【戴无菌手套的原则是未戴手套的手,只允许接触手套的里面,已经戴手套的手只能接触手套的外面。】

02 手术中



(1)动物无菌手术所用的耗材均应事先消毒灭菌并烤干,无菌用品均放置在清洁区域,避免操作者以外的人接触。

(2)用完的物品要有指定位置存放(即手术中用过与未用的物品要分开放置);如要反复使用(如手术器械),应做好清洁消毒工作,及时用75%乙醇消毒。可提前准备两个肾形盘(一个盛消毒酒精,另一个盛生理盐水),最好是不锈钢材质的。基本顺序:酒精-生理盐水-手术操作-酒精。

(3)动物的手术、注射等部位要消毒彻底(手术前需用75%乙醇或碘酒擦拭皮肤,可用适量抗生素撒在手术伤口缝合处)。

(4)手术时间尽量缩短,减少创口与空气接触时间,降低感染。

(5)组织损伤的处理方法和工具的适当使用。

(6)手术中做到仔细操作、细致分离、爱护组织、清除异物、血块和无生机的组织,引流渗出液和脓液等。

03 术后观察与护理



动物营养缺陷和外界环境的变化等都可使细菌的耐药性增强,为提高动物抵抗力促进创伤修复,对动物应做好营养状况的估计,保证得到充足的营养和热量,有利于术后恢复和抵抗细菌的侵袭。动物实验显示,严重营养不良(体重丧失超过1/3时)对伤口愈合有影响。

同时,要做好术后引流、监测。伤口的感染多发生在术后15天内,临床症状主要为发热、伤口局部红、肿、热、痛,有脓性分泌物。



本质上来说,并不存在真正意义上的无菌操作,在所有的创口部位,都会存在污染现象。在实验过程中要仔细认真把控好每个环节,这样才能把实验的感染风险降到最低。(多数情况下,有免疫保护力的动物个体可以在无介入治疗的情况下将低浓度的病原体清除。)


在整个实验无菌操作过程中,最关键的是实验人员必须树立牢固的无菌观念分清有菌区和无菌区。这些原则主要包括如下几个方面:

①在无菌区内,必须要保持所有物品的可视化,因为灭菌物品在可视情况下可以降低被非无菌物品污染的可能性。也就是仅能将台面高度以上的空间视为无菌状态,而在视线以外的创巾和绷带等,则应视为已被污染。

②对于手术操作人员来说,在穿好手术服之后,仅有肩部至腰部位置,手套指尖至肘关节向上5cm范围内可以视为无菌区,这就要求在进行手术操作时,如果采用坐姿操作,则保持坐姿至手术结束,双手要全程保持在腰部水平以上。

③对于无法群定物品是否被感染,则要将其视为被污染,尤其是在器械接触到包裹敞开边缘位置,必须重新更换器械包。

④注意手术包装袋的外包装,如果出现破损、潮湿现象,则应当视为被污染,需要更换处理。


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