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细胞培养中的各种液体

1.培养基


培养基是其中最基础的液体,那么如何选择合适的培养基呢?其实,培养基的选择并没有一个严格的标准,根据细胞株的特点选择合适的培养基是一个老生常谈的观点,这里不多叙述。但仍有2条小秘诀供大家参考。首先,你必须要知道的一个细胞数据库——ATCCAmerican Type Culture Collection)。在ATCC官网上点击Cells and hybridomas链接,输入细胞名称即可获得这种细胞的详细资料,其中涵盖了细胞培养条件等基础数据。另一个比较麻烦的办法,使用多种培养基观察细胞生状态,可以利用一些指标对生长状态就行判断,根据细胞活力和集落形成率等结果选择合适的培养基。此外,培养基的使用肯定是越新鲜越好喔,避免久存(尽量一周内使用)~


 

2.平衡盐溶液


一般,平衡盐溶液主要是维持渗透压和调节酸碱平衡的作用。最常用的基础溶液是Hanks 溶液和磷酸缓冲盐溶液这里需要注意的问题就是,禁止冷冻保存液体培养基!!!冷冻的培养基解冻使用后,有的盐可能无法重新溶解导致渗透压发生降低从而使细胞发生破裂死亡。


3.血清


合适的血清是很重要的,血清含有多种丰富的营养成分,对细胞培养的重要程度不言而喻。我们在新配置的培养基中添加血清之后,需要在2-3周内尽快使用否则血清中的基本成分在解冻后就会开始降解间接影响细胞培养效果。


4.抗生素


抗生素其实并不是必须的添加成分,只有特殊情况下的培养才会加入适量抗生素。常用的抗生素如青霉素、链霉素或者青霉素-链霉素双抗溶液等,青霉素常用剂量为100 U/ml , 链霉素常用剂量为100 μg/ml。如提前配置,须 -20 ℃条件下保存,可采取小包装避免反复冻融。但如果怀疑有污染或者新手操作不熟练可以适量选择加入~


 

5.因子


一般,我们做细胞培养都会做多个对照组,其中有无因子就是一种可能的培养情况,以此来优化细胞的培养条件。常用的细胞培养添加成分是很基本的实验操作,只需要注意多种因子的选择性组合。目前,已有多种特定商用的细胞培养液,如血管内皮细胞培养液、间充质干细胞培养液等。

6.消化液


常用的消化液是0.25% 、0.125%的胰蛋白酶和0.02%的二乙胺四乙酸二钠(EDTA) 溶液它可以使细胞脱离粘附表面,形成单个细胞。一般只需保证合适的操作即可。


7.其他液体


酚红——pH指示剂,中性为红色,酸性为黄色,碱性为紫色。当然也有不加酚红的培养基,为了避免固醇类反应,尤其是哺乳细胞使用不加酚红的培养基。另外,为了避免酚红干扰流式细胞检测,不适用加酚红的培养基。

丙酮酸钠——细胞培养中的替代碳源。

HEPES——细胞培养中最常用的Buffer,高浓度对一些细胞可能有毒。可以搭配碳酸钠(0.34 g/L)一起使用,改善因加入HEPES导致的渗透压增强。

谷氨酰胺——各种细胞都对其有着较高的需求,可以作为细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和能量代谢。需要注意的是,谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应在-20 ℃冰冻保存,使用之前加入培养基。当加有谷氨酰胺的液体培养基在4℃存放两周以上,应重新加入原来量的谷氨酰胺。


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