实验室防污染措施大全
2020-10-18
分类：
实验干货
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在分子生物学实验中，试剂，耗材，样本产生污染会直接导致实验结果不正确，不仅仅耽误了科研的时间，精力，同时会使研究结论错误，后续研究方向产生偏差，会导致大量时间精力的浪费和实验成本的浪费。实验室常见的污染：样品间的交叉污染、产物污染、试剂，耗材污染。非接触式污染发生概率低，基本上是操作时过于粗暴造成。（2）实验操作过程中，因开关盖，吹打，涡旋等操作方式的飞溅。样本处理时，操作尽量小心，对操作力度要有预估，并要有防飞溅意识，如在用液氮手工磨样时要评估研玻的大小，样品不要加过多，倒液氮的动作不能过于粗暴，正在进行研磨的研钵尽量远离其他研钵。实验操作时对操作管内液体的体积有预估，不能过满，开管盖时要注意管内液体高度情况，尽量稳定操作（如减少单手开管的操作，尽量双手操作）；移液吹打动作要轻柔，量程要适宜，防止因为动作过大产生倒吸，污染移液器。涡旋等操作前，一定要确认管盖的状态，是否有破损，是否盖紧。涡旋后要观察是否有液体渗出。（1）过柱纯化时，液体体积较大，需要多次过柱的情况下，样本加进了错误的柱子。首先，对实验操作步骤要熟悉，实验过程要全神贯注。另外需要养成好的实验习惯，防止偶发的失误，养成反复核对的好习惯，重复核对十分重要，错误总是在你以为没问题的时候发生。过柱纯化时，每次过柱都先将柱子和管子一一对应排列好，每次吸取液体入柱前，再确认核对一次，防止排列错误。
吸取液体时，按照一定顺序取移液器吸头，一个吸头对应一次移液操作。实验过程中的中间产物和最终产物，如果处理不当，则很容易以例如气溶胶的方式污染实验室，最常见的是PCR产物的气溶胶污染。在溶液液面和空气的临界处，因为空气和液面摩擦，会产生气溶胶。PCR产物因为其溶液中核酸密度极高，一旦产生气溶胶污染，轻则污染一系列实验结果，重则造成整个实验室在一段时间内不能使用。（1）实验室的规划设计要合理，需要考虑到产物流向问题，如PCR实验室的实验流程是单向的，人流物流不能“回头”，产物的处理要有固定场所，并严格执行，有条件实验室的气流方向要通过气压控制，防止气溶胶“回头”。（2）产物开管时，先做瞬离，可减少气溶胶泄露的概率。（3）如有需要对产物做纯化处理（如PCR产物纯化，文库纯化等），中间过程产生的废液不可直接打入敞口废液缸或者垃圾桶，应准备一可密闭的一次性容器（如50ml螺口离心管），将废液打入，实验结束时，盖紧废液容器盖子后再放入垃圾桶。（4）实验过程中接触过PCR产物的耗材，如移液器吸头，管子等的处理不得随意，有条件可以用84消毒液处理后再丢弃。（5）各个实验房间仪器试剂耗材工具等要专用，特别是产物处理房间，未经处理不得带出，实验人员进出也要更换手套口罩鞋套白大褂等防护用品，防止将污染物带出。试剂耗材污染，基本上因为试剂耗材储存或使用不当造成1、耗材开袋后使用周期过长，每次取用后不注意封口，储存的环境潮湿，易长菌耗材（吸头，管子）开袋时，写上开袋日期，周期性的检查，所有打开时间过长的（如超过一周），统一并袋后再紫外灭菌（记录灭菌日期）。实验室定时进行紫外灭菌，灭菌时打开所有抽屉和柜门，尽量减少灭菌死角。未明确说明不可冷藏冷冻的试剂，尽量低温保存，某些试剂低温会产生析出，则可把使用约一周左右的量的放在室温，其他冷藏或冷冻。某些试剂盒成分可室温放置的原因是内有抗菌成分，可不用如此处理。但是如水等试剂，开封前可室温保存的，开封后如果不能很快用完，则需要分装冷藏冷冻。自配buffer，首先要确认配制过程中使用的容器等无菌，配方中需要采用固体试剂，中间有称量，转移等过程的，配好后根据液体能否高压处理，进行过滤或者高压除菌，对实验室使用的高压灭菌锅，需要用专用试纸确认每次高压效果。
