细胞培养作为不可或缺的工具，从20世纪出现至今经历了巨大的变化。从60多年前基础培养基DMEM的诞生到今天细胞培养成为生物医药、组织工程和再生医学主流研究中不可或缺的部分，难以想象，如果没有了细胞培养技术，生命科学研究将会是什么样子。
很多人都绕不开养细胞这个坎，稍不留神，就给我们造成内心阴影面积三室一厅。不是栽在细胞污染上，就是活力不好，怎么避免细胞不明不白的挂掉？我们来看一下......
培养细胞死亡原因 培养箱内无 CO2 培养箱内温度波动太大 细胞冻存或复苏过程中损伤 培养液渗透压不正确 培养液种有毒代谢产物堆积 培养细胞死亡对策 检测培养箱内 CO2 检查培养箱内温度 取新的保存细胞种 检测培养液渗透压 (注意:大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为 260~350 mOsm/kg。加入额外试剂如 HEPES 或药物都有可能影响培养液渗透压。) 换入新鲜培养液 细胞培养做为生物学研究最基础的技术之一,可以说是渗透科研界的方方面面。工欲善其事,必先利其器。细胞好不好,就看你懂不懂细胞培养的各种技术了。 原代培养 从原代组织中分离细胞的最常用的方法是酶解法(胰蛋白酶和胶原酶)。 用无菌的解剖刀和剪子将组织剪成3~4mm小片，用平衡液(无钙镁离子)清洗组织碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶(Trypsin，100mg组织加入1ml胰蛋白酶)或者胶原酶(Collagenase，50~200单位/ml)，孵育4-18h。离心取上清后，用平衡液清洗几次后，用完全培养基悬浮细胞,进行培养。 传代培养 依据细胞生长的特点,传代方法有3种: 1、悬浮生长细胞传代(离心法) 将悬浮细胞离心(1000 rpm, 3 min)去上清，收集沉淀物加新培养基，混匀后进行传代培养。 2、半悬浮生长细胞传代(直接吹打法) 此类细胞(如Hela细胞)部分贴壁，但黏贴不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁上脱落下来，进行传代。 3、贴壁生长细胞传代(酶消化法) 去除瓶内培养液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液(以消化液覆盖整个瓶底为准)37℃静置2-10min(显微镜下动态监测)。移去蛋白酶液，加入培养液反复吹打瓶壁细胞，离心将细胞沉淀用培养液制成细胞悬液。吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于含有适量新鲜培养液的新培养瓶中进行传代培养。
