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人—卵巢组织细胞悬液制备流程

注 |  以下操作指南中涉及的消化酶以及实验方法仅供参考,实际应用过程中请根据自己的组织样本类型进行细节上的调整。



背景介绍

卵巢表面被覆单层扁平或立方上皮,在卵巢门处与腹膜脏层的间皮相延续。上皮下方为薄层致密结缔组织,称白膜。卵巢实质的周围部称皮质,较厚,主要特点是含大量卵泡;中央部称髓质,主要由疏松结缔组织构成,含较多弹性纤维和血管。

0.png卵巢组织示意图

实验仪器及耗材0 (1).png实验步骤

  1. 用PBS清洗组织后放置在培养皿中,用手术刀将组织粗略的切碎。

  2. 这一步对于提高消化效率至关重要!

  3. 切碎的组织转移到含有胶原酶解离液的50 mL离心管中(10 mL/组织,但这取决于组织的大小)。

  4. 拧紧盖子,用封口膜密封。

  5. 37 °C 孵育45分钟。每10分钟摇晃一次。

  6. 用100 μm细胞过滤器过滤。450g离心5分钟。

  7. 小心去除上清液,留下的液体在0.5 mL和1mL之间。

  8. 细胞沉淀用5 mL PBS重悬。

  9. 用台盼蓝染色后进行细胞计数器检查细胞活力,满足需求则继续下一步。

  10. 450g离心5分钟,弃上清。5 mLPBS重悬。

  11. 重复步骤9,使用台盼蓝血细胞计数仪分析细胞数量和活性。

  12. 检测细胞活性,活性在85%以上可用于后续测序实验。

制备结果

0 (2).png
注意:尽量选取新鲜的组织样品进行操作,组织离体时间多长细胞容易死亡。影响最终的实验效果。


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