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基础实验中的抗体选择过程和避坑Tips

基础实验中,抗原抗体结合反应是我们很常运用的一个原理,像免疫组化、免疫荧光、免疫印迹试验(Western Blot)、ELISA等都是常见又很重要的几种实验。而实验的关键步骤,就在于抗体的选择。抗体选择不好,实验结果可能不尽如人意。


因此,本文和大家分享一下抗体选择的过程和一些避坑TIPS。

我纯小白时期刚进入实验室请教前辈时,有个大神就跟我分享经验,总结起来,就是选择抗体,一看牌子,二看你自己抗体的需要。

怎么理解呢?看牌子就是国产的赛默飞、武汉三鹰还有国外的Abcam、CST等都是知名品牌,一般大牌子,做出来的东西都不会非常差。像CST就是基本上常见的通路信号分子的抗体都有,但是我实验涉及的抗体就没有。


再者就是看你自己的需要,比如要是你师兄师姐留给你兔抗的二抗,那优先选择兔源的。还有就是普遍认为选择单抗特异性较强,但是这不是绝对的,因为我用某A开头的牌子的多抗,染出来的免疫组化的效果也是不错的。


这里推荐一个超好用的抗体汇总网站https://www.citeab.com/,比其他很多攻略里推荐的Antibodyresourse之类的网站,纳入的文章和抗体数量都要多一些,点击进去之后,页面是这样子的。

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注册下,在Search处输入自己的抗体名称,选择自己的使用用途,就可以看看自己的目标抗体,目前已经发表的文章里,使用的较多是哪家公司的抗体。


相关文章的图片后期也能成为你实验结果的对比。


有几家目的公司之后,就看看他的货号,上抗体官网查询。主要看的就是文章的发表数量、兔抗/鼠抗、单抗/多抗,适用于哪些实验(这个取决于你的实验目的)。

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还有,几个小TIPS分享给大家:

第一是购买之前问问实验室有没有人有相关抗体购买经验,特别是PI3K、P16这些较为常见的抗体,甚至可以借一点用用,没准你就放弃这个课题了呢(开玩笑)。还有就是有些小程序上有积分送抗体试用装的活动,可以先试用一下,看看效果如何,再决定是否购买该抗体。


第二是买小剂量优于买大剂量,能买10ul不买40ul,100ul的挺难用完的,特别是免疫组化和WB的实验很多抗体可以反复利用,更没有必要购买大剂量的抗体。土豪课题组随意,当我没说。


第三是提前至少一个月选购,我的实验在疫情期间开展的,大量国外的渠道那时候都受到了影响,细胞用的血清货期都变长了,像我同学的抗体足足等了一个月,严重拖累了实验的进度。


第四就是选择一家靠谱的经销商,买抗体无非就是从经销公司和抗体公司两种地方购买。如果这家经销公司经常去你们实验室送货,那当然优先选择它。它会更快,而且保存更好,即使联系不上你,他也会有很多办法把货送到你手上/通知到你本人。血的教训就是同学贪便宜,选了个小公司的,然后抗体放在实验室门口两天,无人知晓,她自己本人也不知道。过后我也只能安慰她抗体里有叠氮钠,应该不会那么容易坏的。


第五是我以上介绍的心得体会比较适用于目的基因抗体的选择,像实验中的二抗,WB的内参基因那些的话,选择就比较多了,也没有必要千挑万选。实验室里借/交换一点点试试看,或者国产的很多品牌都做的很不错。


第六就是多问人,多学习,多查资料,说的不对的大家可以留言互相交流。


好了,以上就是师姐关于抗体选购的经验啦,希望以后有机会可以跟大家分享抗体后续使用还有其他一些科研路上的心得吧,还有很想出一期社恐如何在实验室里打开局面。想听什么可以留言。


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