科研星球

实验新手常犯的三大错误操作

PCR 扩增目的基因


师兄:第一次带师弟做 PCR,准备扩一段目的基因,师弟熟门熟路地从移液器支架上取下了 2.5μL 和 100μL 的 research plus 放到了桌上躺平。那一刻内心强烈 OS:我那宝贵的枪是你能随便躺平的吗?


实验 Tips:

使用移液器前,先准备好所有实验材料,PCR 实验需要低温,因此务必将模板、酶等实验材料在冰上操作;

使用移液枪时选择带滤芯的枪头,防止交叉污染;

如果退火温度尚未确定,试试在 Tm 值附近 5℃ 的范围,温度由高到低进行测试,即可以估算出最佳退火温度。





感受态细胞制备


师姐:有一次,我带师妹做感受态细胞,师妹说她知道感受态细胞,但她一直是购买的商品化的 DH5α 感受态细胞,看来是不知道有些实验室感受态是自己制备的。


实验 Tips:

要密切关注细菌的生长状态,多次转接或者储存于 4℃ 的细菌就不要用啦;

操作在冰上进行且保证环境无菌,记住感受态细胞是很脆弱的,用枪吹打时要温柔的对待它哦;

提前预冷离心机,否则临到使用再打开的话,又要白白浪费宝贵的实验时间了。




细胞培养


师兄 A:实验室细胞房一直很干净,可是上次来新人后,细胞培养箱里面菌落养的比细胞还要好 (╥﹏╥)。


实验 Tips:

细胞房的规范不仅要贴在墙上更要记在心里,规范的管理才有可靠的实验哦;

超净台/生物安全柜内的设备和耗材务必合理分区,避免混乱造成不必要的污染;

需要无菌操作的步骤要尤其注意,酒精千万不能省;

二氧化碳培养箱需要定期清洁和高温消毒,其次向培养箱承液盘里加入的液体一定要保证是无菌的哦!




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