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Percoll or Ficoll?分离免疫细胞你选对试剂了吗?

Percoll?Ficoll?初次接触它们傻傻分不清。


对于熟练分离原代免疫细胞的筒子们来说,势必不会陌生它们,但刚刚对免疫细胞有概念的新手们来说,应该是不太容易明白我说什么吧!可能也分不清它们,那么,我们就来和它们正式Say hi吧!

它们是什么?


Percoll和Ficoll真是人类生命科学历史上最伟大的发明之一(个人认为),这也需要感谢GE Health(通用电气医疗集团),到目前为止,GE出品必是精品(GE公司快打钱)。
根据这两个产品的说明书,我们能明确它们分别的概念。

Part 1 Percoll

Percoll是带有不可透析的聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 涂层的二氧化硅溶胶,尽管它是无毒的,并不意味着我们能把它塞到嘴里玩耍哦!

Percoll可以用全能来形容也不为过,它在现有的生物学介质中是非常特殊的。

1、它不仅涵盖了足够的对于所有感兴趣的生物颗粒的恒定密度;拥有生理离子强度和 pH ;
2、在全部梯度中是等渗的;
3、低粘度;
4、无毒性;
5、不会渗透生物膜;
6、无菌且可以重复灭菌;
7、在适度的离心力下将自动形成梯度;
8、和生物材料兼容;
9、很容易从被纯化的材料中去除;
10、不影响分析程序;
11、不会猝灭放射性分析;
12、并且它能形成连续梯度和不连续的两种梯度;
13、梯度的稳定性意味着梯度可以预制以提供可重复性的结果;
14、使用带颜色的Density Marker Beads进行梯度分析十分简单;
15、Percoll 不影响被分离的材料进一步的研究;
16、成功几率极高。

如果资金充裕,我们又有什么理由拒绝它呢?

Part 2 Ficoll

一般提起Ficoll,我们常说的是Ficoll-PaqueTM PLUS,它是一种无菌的、用于提纯少量或大量人外周血中高产和高纯度的淋巴细胞的即用型密度梯度介质。它是一种密度为1.077 ± 0.001 g/ml 的水溶液,每100 ml溶液中含5.7g Ficoll PM400、9 g 泛影酸钠及 0.0231 g 依地酸钙钠。

Ficoll PM400 是一由蔗糖和表氯醇合成的高分子量 (Mr 400 000) 聚合物,可溶于水。Ficoll PM400 的分子高度分支,近似球形,以10 nm的斯托克斯半径紧密的盘绕在一起。与分子量相同的线性多糖 (如葡聚糖,Mr 400000 : /h/ 49 ml/g) 相比,Ficoll PM400 具有低特性粘度 (17 ml/g),具有低渗透压。

泛影酸钠是一种方便与Ficoll PM400形成的低粘度高密度溶液的化合物。泛影酸钠 (Mr 635.92) 是 3,5- 双 (乙酰胺基) -2,4,6- 三碘苯甲酸的钠盐。由于泛影酸钠是一种光敏物质,因此Ficoll-Plaque PLUS必须避光储存。Ficoll-Plaque PLUS中泛影酸钠的作用是提供了为有效去除淋巴细胞中其它细胞所必需的最佳的密度和渗透压。

对于分离淋巴细胞来说,Ficoll真的会让你用的时候感到有如神助,但它可是有毒的,不要玩火,同时,还是这句话,如果资金充裕,请将它们全部收下!甭客气!


它们的差异


尽管它们都是极端优秀的试剂,但是在选用的时候,我们难免还是会迷惑,因为它们的产品型号真的好多,但是不用担心,可以参考表1,就能直观的看到Ficoll和Percoll的差异。

表1不同Ficoll和Percoll的差异:

产品选择

细胞类型

客户类型

材质

监管文件支持

Code No.

Percoll

适用于分离细胞,病毒和亚细胞器

科研客户

PVP涂层硅胶介质

17-0891-02(250mL)

17-0891-01(1L)

Percoll Plus

适用于分离细胞,病毒和亚细胞器

临床应用客户

烷硅涂层硅胶介质

17-5445-02(250mL)

17-5445-01(1L)

Ficoll-Paque Plus(1.077)

人外周血,骨髓,脐带血单个核细胞分离(淋巴细胞)

科研客户

合成多聚蔗糖

17-1440-02

(6 × 100mL)

17-1440-03

(6 × 500mL)

Ficoll-Paque PREMIUM(1.073)

人单个核细胞的分离(特别适用于MSC,干细胞、及单核细胞)

临床应用客户

合成多聚蔗糖

17-5446-52

(6 × 100mL)

Ficoll-Paque PREMIUM(1.077)

人外周血,骨髓,脐带血单个核细胞分离(淋巴细胞)

临床应用客户

合成多聚蔗糖

17-5442-02

(6 × 100mL)

17-5442-03

(6 × 500mL)

Ficoll-Paque PREMIUM(1.084)

人单个核细胞的分离(分离与红细胞结合的淋巴细胞及大小鼠的血细胞)

临床应用客户

合成多聚蔗糖

17-5446-02

(6 × 100mL)


需要提示的一点是,如果都是人的免疫细胞,正常情况下购买Ficoll-Paque Plus(1.077),入股不亏。但如果是小鼠的免疫细胞,Ficoll-Paque Plus(1.077)也能用,但资金充裕的话,还是选择Ficoll-Paque PREMIUM(1.084)会比较好哦!

感谢GE的技术老师支援,他们有一句话我到现在都奉为金尊玉律——‘Ficoll能做很多事,但Percoll无所不能,Ficoll完不成的,Percoll都能做到。’

Percoll是一个具有致命吸引力的试剂,但是使用的时候,需要自行参考其它文献再进一步摸索对应目的实验的最佳使用条件。

筒子们,你们选对试剂了吗?

Tip!说明书说明一切!


当选择适合自己实验的试剂后,拜托各位一定要仔仔细细地看它们的说明书,不要嫌少,起码五遍打底。

这两种试剂的使用方法在说明书里已经说得非常清楚,千万不要自己瞎编,以及万万不要根据自己课题组‘靠谱’的师兄师姐们给的条件去修改厂家给的必参考条件,否则后续实验失败就只能抱头痛哭。

想知道我啥意思?

那还不是因为曾经我见过有个小哥用Ficoll分离肿瘤病人血液里的PBMC细胞时,用4°C高速离心的原因呗!

竹篮打水一场空!


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