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【Protocol】一种高效的质粒提取新方法

本文参考质粒提取专利(WO2009111336A2)方法


溶液配制:


  • 溶液1:1 M tris-Hcl 5 ml,0.5 M EDTA-Na2 pH8.0 2 ml,水93 ml。

  • 溶液2:NaOH 0.8 g,水 90 ml,10% SDS 10 ml。

  • 溶液3:11.44 ml 冰醋酸,5.889 g KAc,7.916g MnCl2(4H2O),5.88g CaCl2(2H2O),87 ml水。

  • 溶液4:40 g PEG8000加很少的水溶解(注意瓶子刻度线,约到80 ml。不停搅拌至溶解,约30 min),转入量筒,用水洗瓶子加入量筒定容100 ml即可。

  • 溶液5:50 ml水,50 ml异丙醇。

 

实验步骤:


1. 养菌,8100 g离心1 min收菌1-2 ml,倒掉上清液,150 ul溶液1重悬,150 ul溶液2裂解,150微升溶液3中和反应。


2. 16000 g离心2 min,上清液转移到新离心管。


3. 加1/9体积溶液4,混匀,4度离心5 min,倒掉上清,加入500-1000 ul 溶液5洗盐。


4. 16000 g离心2 min,彻底去除上清液。


5. 加需要体积的无菌水溶解DNA。

 

优点:没有酚氯仿等有毒试剂;PEG真的超低浓度可以沉淀下来质粒;去RNA的效果超过预期,直接提能媲美试剂盒。

 

注意:如果放大量,估计体积要调整,没有试验。


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