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遇到细胞空泡化,该如何解决?

“细胞空泡化”在细胞培养中也是一个常见问题,它的出现原因有多种,实验人员碰到往往会很头疼。


在文章中小编给大家列举出了可能出现这种情况的原因,方便大家进行分析选择解决的方法。


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可以引起细胞空泡化出现的原因有哪些?


1)细胞老化

原代细胞培养的过程中经常出现这样的情况,是有些细胞处于终末分化状态,不会再分裂,时间长了就会空泡化而死亡。

传代细胞出现这种状况比较少见,出现的原因一般都是因为细胞传代次数过多,老化严重。


2)PH值

培养液的PH值与细胞正常所需PH值差别太大。


3)胰酶消化

 胰酶消化时间过长,会导致细胞状态受损,有时也会出现这种情况。除此之外,还有一个大家容易忽略的问题,在香港的一家科研机构表明如果消化细胞吹打时力度过大,产生太多气泡,长期存在也会出现这种现象。


4)自噬

细胞缺乏营养导致饥饿诱导形成自噬也会形成空泡化,但是这种空泡在光学显微镜下是看不到的,只有在电镜下才能观察到。


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5)细胞代谢

在细胞培养过程中,由于血清浓度不够、药物作用、外界刺激等情况下导致细胞代谢出现问题,内质网应激状况下会出现细胞空泡化的情况。


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6)污染

衣原体感染:一旦一些细胞出现空泡化,继续培养,空泡范围会扩大,即使传代后也如此,出现这种情况,细胞基本无法挽救。后来检测发现,此种细胞存在衣原体的感染。

支原体污染:支原体污染在不严重的时候细胞是没有什么明显症状的,而且也无法通过光学显微镜观察到,只有在严重的时候会导致细胞状态变差,出现细胞空泡化的现象,细胞膜上也会出现小黑点附着。

病毒污染:在文献上也有说病毒污染也会导致细胞出现空泡化的情况。




遇到细胞空泡化我们应该如何解决?


1)如果是因为细胞老化的原因,可以通过复苏代数靠前的细胞进行培养。

2)如果是培养液PH的问题,可以通过更换培养液调整到合适的PH值,再进行培养。

3)在传代时,要选用合适浓度的胰酶和选取适当的消化时间进行消化,在操作时避免吹打太过用力出现太多气泡。

4)要保证细胞培养所需的营养充足,可以通过增加血清浓度和在培养基中加入谷氨酰氨解决

5)尽量使用质量好和渠道正规的胎牛血清,因为这样的血清营养丰富且外源刺激因子少,可以有效的避免出现这类问题。

6)在细胞培养时要严格进行无菌操作,操作时要规范,减少污染的可能性。可以通过试剂盒检测细胞是否污染,对于已经污染的细胞灭菌后直接处理,避免污染其他细胞。

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原代大鼠乳鼠心肌细胞(空泡)

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A549细胞(空泡)


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