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让实验结果更稳定、更可靠:小鼠净化流程及注意事项

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保持实验鼠的健康,对于实验结果的稳定性和可重复性至关重要。但在实际操作中,实验鼠由于各种原因导致感染的情况屡见不鲜。被细菌,病毒和体内外寄生虫感染的小鼠,不仅自身健康受到威胁,混淆研究成果,甚至还有可能传播给其他品系的小鼠,因此小鼠的净化非常关键和必要。



何时需要净化?


在正常的饲养过程中,如果小鼠状态正常,净化是不必要的,但是遇到以下情况建议净化:

  • 动物实验结果不稳定,重复性差,实验鼠已经确认受到病原体污染;

  • 怀疑受到感染,但是已经出现以下症状:繁殖能力降低,实验鼠健康状态不好,已经影响到实验鼠生命或者影响实验结果;

  • 进口鼠漂洋过海来到国内动物房,需要隔离检疫以及净化;

  • 实验鼠要“搬家”,“新家”的屏障系统更严格。



如何净化?


净化通俗点讲,是将确认病原体感染或者疑似感染的“脏脏鼠”传代获得不含特定病原体的子代鼠。从小的方面讲,净化是为了实验鼠品系的健康不受到威胁,保证后续实验不受病原体感染影响,从大方面讲,也是为动物屏障内其他品系的健康保驾护航。

 

那么净化如何做?

 

洗洗澡?喷点酒精?NO,NO,NO!

 

要是那样能做到净化就真的太好了,因为真正的净化类似“杀鸡取卵”:实验鼠自身虽然被感染,但是精子或卵细胞在体内是干净无菌,很多情况下净化是要从感染的亲本中,获得“干净”的子代。因此小鼠净化是“牺牲我一个,健康你我它”的壮举,需要为之付出生命代价。


净化方式有以下3种:


剖腹产

 

由于胎盘屏障会隔绝大部分病原微生物,因此可以通过剖腹产的方式,取出后代鼠,从而获得没有被感染的新一代实验鼠。剖腹产过程中,为了避免子代受到感染,母鼠处死后以及剖出的鼠仔都要消毒。此外还要提前准备好代乳奶妈,提前做好食仔预防,剖出的鼠仔后续要由奶妈代养。

 

优点:实验鼠自然交配即可,净化快


缺点:

  • 获得子代数量有限

  • 需要精确掌握母鼠的生产时间,在母鼠生产前进行剖腹产,否则剖出的鼠仔就属于早产,后续饲养也有比较高的死亡风险。

  • 垂直传播的病原微生物感染是不能通过该种方式进行。


体内胚胎移植


将雄鼠和超排后的雌鼠交配,然后处死见栓的雌鼠,通过冲洗输卵管的方式收集受精卵,胚胎移植到无感染的假孕母鼠输卵管或者子宫中,从而获得净化后的实验鼠品系。


优点:获得的子代鼠仔是足月生产


缺点:

  • 获得子代数量有限

  • 检栓后,见栓的雌鼠都会被处死,但是处死后不一定都能取到受精卵,因此有可能出现断种。


IVF净化


雄鼠处死后取精子,然后将激活后的精子与超排的卵母细胞进行体外受精(IVF, in vitro fertilization)得到受精卵,再移植到代孕小鼠的子宫中,生育出净化的子代鼠仔。该方式是目前最popular的净化方式。

 

优点:

IVF技术可以实现1只雄鼠对应10-20只雌鼠同时受孕,因此IVF净化,在净化的同时,还能达到快速繁育的目的,同时获得更多数目的子代鼠,效率高,缩短繁育周期,极大地加快科研进度。


缺点:有一定技术门槛



如何选择净化方式?



由于剖腹产存在“早产”和食仔的风险,为了减少对后续实验的影响,现在很少采用这种方式。而体内胚胎移植和IVF净化这两种净化方式,可以根据现有小鼠情况以及后续实验需要而定:


净化类型需提供亲本数量子代数量
IVF净化雄鼠:≥ 8 周龄,≥ 2 只6–10 只新生小鼠
体内胚胎移植

雄鼠:≥ 8 周龄,≥ 2 只

雌鼠:3–8 周龄,≥ 4 只

新生小鼠(具体数量视雌鼠数量及周龄而定)
IVF净化+ 快速繁育雄鼠:≥ 8 周龄,≥ 2 只30–50 只新生小鼠


净化后的实验鼠通常是SPF级的,为了确保净化效果,净化完成后会将小鼠品系单独送检,检测合格后,艰巨而伟大的净化任务就完成了!在此致敬为净化而做出牺牲的亲代鼠!


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