请务必阅读以下注意事项后再开始实验:
1. 聚合前的丙烯酰胺具有神经毒性,为了您的安全和健康,操作时请穿实验服并戴一次性手套及口罩操作。
2. APS配制成10%溶液后,应分装保存在-20°C。将配置成的10%的APS溶液存放在4°C时易发生失效,保存时间较短,应尽量减少室温存放时间,以防失效。
3. TEMED易挥发,使用后请盖紧瓶盖并4°C保存。另外凝胶凝聚的速度与温度及光照关系密切,可通过适当调节TEMED 的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度,配置胶时最后加入10%的APS溶液和TEMED并充分摇匀。
4. TEMED易燃,有腐蚀性,需注意防护。
试剂配方
30%(w/v)Acrylamide (1 L)
称取290 g Acrylamide和10 g BIS 溶于800 ml的ddH2O,充分搅拌溶解。定容至1 L后用 0.45 μm 滤器滤去杂质。于棕色瓶中4℃保存。
10%(w/v)过硫酸铵(10 ml)
称取1 g过硫酸铵,溶于10 ml的ddH2O。分装后冻存在-20℃。4℃保存可使用2周左右,超过期限会失去催化作用。
10% (w/v) SDS (十二烷基磺酸钠)
称取10 g SDS粉末加ddH2O至100 ml,溶解后,高温高压灭菌后待用。
1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)
称取181.7 g Tris base和800 ml ddH2O用浓盐酸调至pH 8.8,加 ddH2O定容至1 L,高温高压灭菌后室温保存 。
0.5 M Tris-HCl (pH 6.8)
称取60.7 g Tris base和800 ml ddH2O用浓盐酸调至pH 6.8 ,加ddH2O定容至1 L,高温高压灭菌后室温保存。
TEMED
直接使用。