1、哪种浓度的酒精消毒效果最好？

75%酒精杀菌力最强，它能使蛋白质脱水和变性，在3～5分钟内杀死细菌。因此，它用于消毒和防腐，适用于皮肤和器械、塑料制品等的消毒。高浓度的酒精（95～100%）能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，使酒精分子不易透入，因此杀菌能力反而弱。

2、试剂的等级有哪些？

根据化学试剂的纯度，按杂质含量的多少可分为四级：

一级试剂为优质纯试剂，通常用G·R表示；

二级试剂为分析纯试剂，通常用A·R表示；

三级试剂为化学纯试剂，通常用C·R表示；

四级试剂为实验或工业试剂，通常用L·R表示。

此外，根据特殊的工作目的，还有一些特殊的纯度标准，例如光谱纯、荧光纯、半导体纯等。使用时应按不同的实验要求，选用不同规格的试剂。

3、固体试剂的溶解知多少？

较大的固体颗粒溶解前，应该先粉碎固体。固体的粉碎是在洗净和干燥的研钵中进行的。研钵中所盛固体的量不要超过研钵总容量的三分之一。溶解固体时，常用搅拌，加热等方法来加快溶解速度。

搅拌液体应手持搅拌棒并转动手腕，转动速度不要太快，也不要使搅拌棒碰在器壁上。搅拌试管中的液体时，搅拌棒可以转动，也可轻轻上下搅动，但不要用力过大，以免将试管弄破。还可用振荡试管的方法代替搅拌。

加热以加速固体溶解的方法与加热液体时相同，即一般有直接加热方法和水浴加热方法等。要视被加热物质的稳定性，而选用不同的加热方法。另外还要注意在容器上盖表面皿，以防止液体蒸发。

4、下面这些你注意了吗？

称量试剂的天平应保持清洁、干燥，避免潮湿及腐蚀性气体的侵蚀。在进行称量操作时，被称取的试剂应置于称量纸上或其它器皿内，不可在盘中直接称量。

在配制强酸、强碱溶液或接触有毒性药物时，应严格按操作规程进行。如稀释硫酸时，应谨慎的将浓硫酸缓缓倾注水中，切不可把水倒入浓硫酸中。

5. 如何测定引物的OD值？

用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间（吸光度太高或太低会有较大的误差）。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1 ml 并在1 ml 标准比色皿中测定其吸光度，即为所测体积的OD值，进而可以计算出母液的OD值。

举例：您拿到一管干粉的DNA，用1ml水溶解成母液，取该母液50 μL 稀释成1 ml 并在1 ml 标准比色杯中测定的吸光度为0.25，说明该50 μL中含有0.25OD的DNA，也即说明原来1ml母液中含有5OD的DNA。

6. 怎样溶解引物？

生工的合成报告单给出了每OD引物稀释为100 μmoL/L（即100 pmol/ul）浓度的加水量，您可以根椐您的实验需要加入适量的无核酸酶的双蒸水（PH>6.0）或TE缓冲液（PH7.5~8.0），开启瓶盖溶解之前最好在3000~4000转/分钟的转速下离心1分钟，防止开盖时引物散失。

7. 合成的引物应如何保存？

没有溶解的引物非常稳定，可以在-20℃下保存至少1年，溶解好的引物可以事先稀释为100 μmoL/L 的储存液，分装数份保存于-20℃冰箱，可以保存至少半年以上（反复多次冻融会降低使用寿命）。使用前，将浓溶液稀释成工作液（10 pmol/ml或20 pmol/ml）后进行实验。

注意：工作液千万别用TE稀释，要用DEPC水，或去离子水稀释.因为TE可以鏊合镁离子，镁离子对Taq酶活性发挥至关重要，影响PCR反应。

8. 如何检测引物的纯度？

实验室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的一定浓度的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，<12个碱基的引物用20%的胶，12~60个碱基的引物用16%的胶，>60个碱基的引物用12%的胶，取0.2OD左右的引物，用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和，上样前加热变性（95℃，2 min）。加入尿素的目的一是变性，二是增加样品比重，容易加样。600 V 电压进行电泳，一定时间后（约2~3小时），剥胶，用荧光TLC板在紫外灯下检测带型，在主带之下没有杂带，说明纯度是好的（有时由于变性不充分，主带之上可能会有条带，乃是引物二级结构条带）。

9. 一般的合成的引物在5'和3'末端有磷酸基团吗？

没有，5'和3'末端均为-OH基。如需要加磷酸基团，订货时需特别注明。

10. 合成的引物进行PCR反应时无目的带，怎么办？

PCR反应失败的原因很多，可以从以下几个方面考虑。

（1）引物和模板是否配对，同源性有多大？

（2）引物本身是否有立体结构.

（3）PCR反应用试剂是否能正常工作？

（4）PCR仪是否工作正常？

（5）PCR反应条件是否合适？