这两个实验当然不可以互换。而且最好都要做。为什么? qRT-PCR检测得是mRNA水平表达,而western检测得是蛋白水平表达。可是蛋白不就是由mRNA翻译出来的么?表达水平应该与mRNA接近甚至相同啊!还真的不是!因为mRNA到蛋白过程还有多种影响因素,例如在哺乳动物体内,miRNA会结合在mRNA的3'UTR区,在不影响mRNA水平下,抑制蛋白质表达水平;即使mRNA在没有miRNA等因素的影响下翻译出来蛋白质,其他因素也会影响蛋白质的含量,例如,如果蛋白质的糖基化修饰发生错误或者异常,可能会导致蛋白质异常折叠,发生降解,使蛋白含量降低;再例如,目的蛋白虽然是胞浆蛋白,但是可以通过胞外囊泡分泌出去,从而降低胞内该蛋白的含量! 综上,细胞内多种因素都可能导致mRNA与蛋白水平表达不一致,而探究mRNA或蛋白被何种机制调控也是很有意思的一件事。